建昌帮的传统炮制风格辅料工具独特，工艺取法于烹饪，饮片讲究形色气味，毒性低疗效高^[1]。在工具方面，刀刨齐全，特色工具多；在辅料方面，选料独特，遵古道地，其中尤以谷糠的运用最具特色，有谷糠煨药材、谷糠煅药材、谷糠炒炙药材等，使“南糠北麸”成为区别南北炮制帮派的一个显著特征；在炮制工艺方面，多取法于烹饪技术，做到“炮制虽繁，必不得省工夫；辅料虽贵，必不得短斤两”；多用文火煨、炙，使饮片纯真味厚，同时还精于各种去毒工艺，使生产的饮片毒低效高。

本课题根据建昌帮流传文献记载以及预实验，以蜜糠为特色辅料，选取白术、白芍、山药作为代表性饮片，并选取各饮片的主要成分含量及外观性状，对炮制过程中的具体参数进行研究，以星点设计数学模型，筛选各品种的最佳工艺，确定具体技术参数，并探索其规律。

1 仪器和试药

1.1  仪器 UltiMate3000型高效液相色谱仪(美国Dionex公司，包括PDA-3000型二极管阵列紫外检测器和Chromeleon工作站)，AE240 型十万分之一电子天平瑞士梅特勒－托利多公司)，YF-11B型中药粉碎机（中国瑞安永历制药有限公司），ST20型红外测温仪（美国雷泰公司），电热鼓风干燥箱（沪南电炉烘箱厂）；Waters ACQUITY UPLC 超高效液相色谱仪；万分之一分析天平（奥豪斯仪器有限公司）；KQ-500E 型超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；高效液相色谱仪（Waters 2695），数显恒温水浴锅（国华电器有限公司，HH－6），台式低温高速冷冻离心机(Sartorius Germany)。

1.2  试药 白术购于樟树天齐堂药业，经江西中医药大学赖学文教授鉴定为菊科植物白术Atractylodes macrocephala的根茎；白芍购于亳州蜀中药业有限公司，经江西中医药大学葛菲教授鉴定为毛茛科植物芍药Paeonialactiflora pall的干燥根； 山药药材购于亳州蜀中药业有限公司，经江西中医药大教授葛菲教授鉴定为薯蓣科植物薯蓣Dioscoreaopposita Thunb.的干燥根茎；蜂蜜（上海冠生园有限公司），糠皮（南昌市郊区农家）；白术内酯Ι、Ⅲ对照品（南昌贝塔生物科技有限公司，批号10042，10044）；尿囊素标准品( 111501-200202)购于中国食品药品检定研究院；甲醇为色谱纯; 芍药苷对照品（批号10395-201307)购于南昌贝塔生物科技有限公司；芍药内酯苷对照品（批号140516）购于上海胤珂生物科技有限公司；乙腈为色谱纯；水为娃哈哈纯净水；黄酒（会稽山绍兴酒股份有限公司）；其他试剂为分析纯。

2  方法与结果

2.1  蜜糠炒白术的制备^[2]  取定量的蜜制谷糠，撒入热锅内，炒至冒青烟时，将谷糠铺平锅底并向四周铺开（在炒制过程中用测温枪控制锅底温度）加入净选切制后的白术饮片，向四周的蜜糠覆盖30s后，快速拌炒至饮片表面呈嫩黄色或色变深，药片松脆易折，透香气，取出筛去蜜糠，趁热倒入容器内，密闭转橘黄色，即得。

2.1.1  白术内酯Ⅰ，Ⅲ的含量测定

2.1.1.1 色谱条件 Diamonsil C₁₈色谱柱(4.6mm× 250mm，5μm)，流动相甲醇-水(60∶40)，柱温30℃，流速1 ml·min^-1，检测波长220nm，进样量10μl。见图1。

 

 

1-白术内酯Ⅰ；2-白术内酯Ⅲ

图1  对照品(A，B)及样品(C)的HPLC色谱图

 

2.1.1.2  对照品溶液的制备 精密称取白术内酯Ⅰ，Ⅲ对照品适量，分别加甲醇制成质量浓度分别为263，242 ng·ml^-1的对照品溶液。

2.1.1.3  供试品溶液的制备 取白术炒制样品适量粉碎，过4号筛，精密称定样品粉末2g，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，称定质量，超声30min，加甲醇补足减失的质量，摇匀，静置，取上清液过0.45 μm微孔滤膜即得。

2.1.1.4  线性关系考察 精密吸取白术内酯Ⅰ对照品溶液0.5，1，2，4，6，8，10μl，按“2.1.1.1”项下条件测定，以峰面积值为纵坐标，质量浓度为横坐标，得回归方程Y= 63.882X + 1.119(r²= 0.9992)，线性范围131.5~2630 ng，精密吸取白术内酯Ⅲ对照品溶液1，2，4，6，8，10μl，按上述方法操作，得回归方程Y= 44.357X-0.3164(r² = 1) ，线性范围242~2420ng。见图2~3。

 

          

 

图2 白术内酯Ⅰ线性关系图                                      图3 白术内酯Ⅲ线性关系图

 

2.1.1.5  精密度实验 精密吸取“2.1.1.2”项下各对照品溶液10μl，按“2.1.1.2”项下条件连续测定6次，计算白术内酯Ⅰ，Ⅲ 峰面积的RSD分别为1.2%，1.5%，表明仪器精密度良好。

2.1.1.6  稳定性实验 取同一供试品溶液，分别在0，6，12，15，18，24h按“2.1.1.2”项下条件进样，计算白术内酯Ⅰ，Ⅲ峰面积的RSD分别为0.8%，2.1%，表明供试品溶液在24h内稳定。

2.1.1.7  重复性实验 精密称取同一样品6份，按“2.1.1.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1.1.1”项下条件测定，计算白术内酯Ⅰ，Ⅲ峰面积的RSD分别为1.8%，2.1%，表明该方法重复性良好。

2.1.1.8  加样回收实验 精密称取已知指标成分含量(白术内酯Ⅰ，Ⅲ质量分数分别为0.1693，0.3293 mg·g^-1) 同一药材粉末6份，每份1g，按“2.1.1.3”项下方法制备供试品溶液，精密加入一定量白术内酯Ⅰ，Ⅲ对照品溶液。按“2.1.1.1”项下条件测定，计算回收率。结果得白术内酯Ⅰ平均回收率为97.93%，RSD值为1.29%；白术内酯Ⅲ平均回收率为101.15%，RSD值为1.18%。

2.1.2  水浸出物的含量测定^[3]  按照《中国药典》（2015版）(一部)附录XA项下热浸法测定。白术供试品约4g，称定重量，置250ml具塞锥形瓶中，精密加入100ml水，称定重量，放置1h。加热微沸1h后，称定重量，用水补足减失的重量，过滤。精密量取滤液25 ml，置已干燥至恒重的且已经称重的蒸发皿中，水浴蒸干后，于105℃烘箱中干燥，3h后取出使之冷却30 min，然后迅速称定重量，以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的含量(%) 。

2.1.3  星点设计实验

2.1.3.1  设计因素 在单因素考察的实验基础上，选取蜜糠用量（A，蜜糠的质量分数），炒制锅底温度(B)，炒制时间(C) 3个因素为考察对象，以白术内酯I，白术内酯Ⅲ以及白术水浸出物含量的综合OD值为考察指标，按照星点设计表进行样品的制备。星点设计的试验水平及见表1。

表1  星点设计因素水平表

2.1.3.2  数据处理 将白术内酯Ⅰ，白术内酯Ⅲ和水浸出物含量三个指标均标准化为0~1之间的归一值，各指标归一值求算几何平均数和总评“归一值”公式为：OD= (d₁d₂……d_k)^1/k(k为指标数)，三个指标的量均为越大越好，所以采用Hassan方法进行数学转换求“归一值”，dmax公式为：dmax= ( Yi-Ymin)

/(Ymax-Ymin)。采用Design expert 软件进行数据处理，得拟合方程如下。

Y= 28.89-0.2899A-0.07703B-5.7483C-5.025AB-

0.01538AC+5.775BC+ 5.15A2+ 1. 46B2+0.59C2 (r = 0.9197)，P= 0.0002。

2.1.3.3  工艺参数优化和预测 由拟合的曲线方程为数学模型，利用Design expert软件分别绘制各因变量的曲面图。得到优化的最佳工艺为蜜糠的用量质量分数为55.8%，炒制温度为261℃，炒制时间为3.4 min。

 

 

 

图4 各因素对OD值的效应面

根据优选的炮制工艺进行验证试验，一共验证3个批次。每次取大小均匀的生白术饮片100g，按照优选出来的炮制工艺进行炮制。实际测得平均OD值为0.74，而结果预测OD值为0.73，预测值与真实值的偏差为( 0.74-0.73) /0.73 = 1.37%，说明优选出来炮制工艺稳定，可靠。

2.2  蜜糠炒白芍的炒制^[2]  先取一定量的白芍，加黄酒闷润，待吸干后取出。取定量的蜜制谷糠，撒入热锅内，炒至冒青烟时，将谷糠向四周铺开，加入净选切制后的白芍饮片，用四周的蜜糠覆盖数分钟，然后快速翻炒至饮片转淡黄色为度，立即取出，筛去蜜糠，趁热倒入容器内，密闭使转米黄色，即得。

2.2.1  芍药苷和芍药内酯苷的含量测定

2.2.1.1  色谱条件 Waters ACQUITY BEH C₁₈(2.1mm× 100mm，1.7μm)为色谱柱；流动相乙腈- 0.1%磷酸水( 16∶84) ，柱温30℃，流速1ml·min^-1，检测波长为220nm，进样量为2μl。色谱图见图5。

1－芍药内酯苷; 2－芍药苷

图5  标准品(A)及样品(B)的HPLC色谱图

2.2.1.2  对照品溶液的制备 分别精密称取芍药内酯苷芍药苷对照品适量，加入10ml容量瓶中，加甲醇溶解，制成含芍药内酯苷0.04mg/ml和芍药苷0.0635mg /ml的混合对照品溶液。

2.2.1.3  供试品溶液的制备 精密称定白芍粉末0.1g，置于100ml具塞锥形瓶中，加入70%乙醇45ml，称定重量，超声30min，取出放冷，称重，用70%乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液经0.22μm微孔滤膜滤过，即得。

2.2.1.4  线性关系考察 精密吸取混合对照品溶液0.1，0.2，0.5，1，1.5，2μl，按“2.2.1.1”项下条件测定，以峰面积值为纵坐标，质量浓度为横坐标，得芍药内酯苷的回归方程Y= 4×10⁶X -1749.2(r²= 0.9998)，线性范围0.004~0.080μg；芍药苷的回归方程Y=6×10⁶X-3385.4(r²=0.9999)，线性范围0.00635 ~0.127μg。见图6~ 7。

      

图6  芍药内酯苷的线性关系图                                   图7  芍药苷的标准曲线图

 

2.2.1.5  精密度试验 精密吸取“2.2.1.2”项下各对照品溶液0.4 μl，按“2.2.1.1”项下条件连续测定6次，计算芍药内酯苷和芍药苷峰面积的RSD分别为0.97%、0.42%，表明仪器精密度良好。

2.2.1.6  稳定性实验 取同一供试品溶液，分别在0，6，12，15，18，24h按“2.2.1.1”项下条件进样，计算芍药内酯苷和芍药苷峰面积的RSD分别为0.94%、0.82%，表明供试品溶液在24h内稳定。

2.2.1.7  重复性实验 精密称取同一样品6份，按“2.2.1.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.2.1.1”项下条件测定，计算芍药内酯苷和芍药苷峰面积的RSD分别为0.62%、1.16%，表明该方法重复性良好。

2.2.1.8  加样回收试验 精密称取已知含量(芍药内酯苷和芍药苷的含量分4.657、12.476mg·g^-1)的白芍粉末6份，每份0.1g，按“2.2.1.3”项下方法制备供试品溶液，精密加入一定量的混对照品溶液。按“2.2.1.1”项下条件测定，计算回收率。结果芍药内酯苷平均回收率为97.1%，RSD为1.44%，芍药苷平均回收率为99.32%，RSD为0.73%。

2.2.2  蜜糠炒白芍的星点设计

2.2.2.1  设计因素 在单因素考察的基础上，选择炒制温度(A)，炒制时间(B)，黄酒用量(C)，蜜糠用量(D) 4个因素为考察对象，以芍药苷及芍药内酯苷含量的综合OD值为考察指标，采用照星点设计法进行优选。实验设计见表2。

表2 星点设计因素水平表

2.2.2.2  数据处理及工艺预测 采用Design-expert软件进行数据处理，得拟合的方程为：

Y=11.49239-0.072961A-0.783B+0.52179C-0.084738D+1.06978·10-3AB-1.3342·10-3AC +1.6623·10^-4AD- 3.6268·10^-3BC-2.1804·10^-3BD+1.8947·10^-3CD+1.2972·10^-4A²+0.09958·B²-0.01183·C² +3.2494·10^-4D²(P＜0.05)。

利用Design expert 软件分别绘制各因变量的曲面图，见图8。得到优化的最佳工艺为蜜糠用量30%，黄酒用量9%，在260℃下炒制4min。

图8  各因素对OD值的效应面

2.2.2.3  验证试验 根据优选的炮制工艺进行验证试验，一共验证3个批次。每次取大小均匀的白芍饮片100g，按照最佳炮制工艺进行炮制。实际测得平均OD值为0.66，而结果预测OD值为0.65，预测值与真实值的偏差为(0.66-0.65) /0.65 = 1.53%，说明优选出来炮制工艺稳定，可靠。

2.3  蜜糠炒山药的炮制 先用武火将锅底烧至微红，立即倒入定量的预制蜜糠，快速翻炒至冒青烟

时，将谷糠铺平锅底，立即加入山药饮片，用四周的蜜糠覆盖药材，盖上锅盖，密闭半分钟后，快速拌炒至饮片表面呈淡黄色时，迅速取出。筛去蜜糠和灰屑，趁热入容器内密闭至转金黄色时即得。

2.3.1  尿囊素的含量测定

2.3.1.1  色谱条件 色谱柱为Diamonsil C₁₈(4.6 mm×250，5μm)；流动相为甲醇-水(5∶95) ，流速为1ml·ml^-1，柱温30℃，检测波长为224nm。

2.3.1.2  对照品溶液的制备 精密称取尿囊素对照品适量，加20%乙醇制成含尿囊素0.1847mg /ml的标准溶液。

2.3.1.3  供试品溶液的制备 取样品粉末(过80目筛，50℃干燥3h) 0.5g，精密称定，置于25ml 容量瓶中，加20%乙醇至刻度，摇匀，超声3次，每次20min，每两次之间间隔20min，过滤。取续滤液1ml置于1.5ml 离心管中，高速离心(15000r/min) 10min。取上清液过0.45μm微孔滤膜，做为供试品溶液。

2.3.1.4  线性关系考察 精密吸取尿囊素对照品溶液1，2，4，8，10，20μl 注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积值为纵坐标，尿囊素质量浓度为横坐标进行回归处理，得尿囊素的回归方程为Y= 366366X-4822.8，r² = 0.9998，结果表明尿囊素在0.1846~3.6933μg范围呈良好的线性关系。

1-尿囊素

图9  尿囊素标准品(A)及样品(B)的色谱图

图10  尿囊素的线性关系图

2.3.1.5  精密度试验 精密吸取“2.3.1.2”项下各对照品溶液10μl，按“2.3.1.1”项下条件连续测定6次，计算尿囊素峰面积的RSD为0.145%，表明仪器精密度良好。

2.3.1.6  稳定性实验 取同一供试品溶液，分别在0，6，12，15，18，24 h 按“2.3.1.1”项下条件进样，计算尿囊素峰面积的RSD为0.766%，表明供试品溶液在24h内稳定。

2.3.1.7  重复性实验 精密称取同一样品6份，按“2.3.1.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.3.1.1”项下条件测定，计算尿囊素峰面积的RSD为1.03%，表明该方法重复性良好。

2.3.1.8  加样回收实验 精密称取山药粉末(已知尿囊素的含量为0.2358%) 6份，每份0.5g，按“2.3. 1.3”项下方法制备供试品溶液，精密加入一定量的混对照品溶液。按“2.3.1.1”项下条件测定，计算平均回收率为99.71%，RSD=0.82%。

2.3.2  水浸出物含量测定^[3]  按照《中国药典》(2010版) (一部)附录XA项下冷浸法测定。取供试品约4g，精密称定，置250ml的锥形瓶中，精密加水100ml，密塞，冷浸，前6h内时时振摇，再静置18h，过滤，精密量取续滤液20ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105干燥3h，置干燥器中冷却30min，迅速精密称定重量。

2.3.3  星点设计及结果分析

2.3.3.1 因素设计 在单因素考察的基础上选取蜜糠用量(A)，炒制温度(B) ，炒制时间(C) 为考察因素，以尿囊素含量和水浸出物含量的综合加权评分为考察指标，采用星点设计的方法进行工艺优选。星点设计表因素水平见表3。

表3 蜜糠炒山药的星点设计表

图11  各因素对OD值的效应面

2.3.3.3  验证性试验 根据优选的炮制工艺进行验证试验，取大小均匀的生山药饮片三份，按照优选出来的炮制工艺进行炮制。实际测得平均OD值为0.76，而结果预测OD值为0.77，预测值与真实值的偏差为( 0.77-0.76) /0.77 = 1.29%，说明优选出来炮制工艺稳定，可行。

3 讨论与小结

通过对三种蜜糠炒制药材工艺的优选，可以发现有以下共性。

3.1  共性一 炒制方法。先将锅底烧热，趁热倒入蜜糠，待蜜糠冒青烟后，将蜜糠摊开，倒入处理好的药材，用蜜糠覆盖数十秒后，快速翻炒之后会将筛去灰屑的药材置于密闭的容器中，待其颜色加深之后取出。通过对药材的炒制，可以发现，在炒制过程中将药材用蜜糠覆盖可以使药材迅速变黄，在蜜糠未灰化之前迅速赋色于药材; 在炒制之后将药材置于密闭的容器中，可减少饮片气味挥发，令其色泽自然转深和鲜艳。这些也是建昌帮蜜糠炒制药材的特色之一。

3.2  共性二 炒制功效。通过建昌帮书籍的记载、寻访药工及临床用药经验，可以发现白术经蜜糠炒制之后，温中补脾和胃；炒白芍可以调理肝脾，行血活血; 炒山药可以补脾健胃，用于泄泻便溏，脾虚食少。三种药物经过蜜糠炒制之后健脾效果增强，这可能是阐明其炮制机理的一个切入点。

3.3  共性三 炮制具体技术参数。通过星点设计－效应面法优选出的最佳工艺为: 蜜糠炒白术的最佳工艺为蜜糠用量55.8%，炒制温度261℃，炒制时间3.4min; 蜜糠炒白芍的最佳工艺为蜜糠用量30%，黄酒用量9%，在260℃下炒制4min；蜜糠炒山药的最佳工艺为蜜糠用量61.55%，在炒制温度263℃下炒制3.85min。拟定建昌帮蜜糠炒制药物的共性工艺为炒制温度260~ 270℃，炒制时间3~4min。

参考文献

[1]钟凌云，龚千锋，杨明． 建昌帮炮制技术传承与发展初探[J]．江西中医药，2015，46(9)：7．

[2]梅开丰，张帧祥．建昌帮中药传统炮制法[M]．江西省南城县整理建昌帮中药传统小组，1986：172．

[3]国家药典委员会．中国药典，一部［S］．北京：中国医药科技出版社，2010：附录62．

                                                   （本文刊于《时珍国医国药》2017年第11期）